DANH MỤC THIẾT BỊ CHO PHÒNG NUÔI CẤY MÔ THỰC VẬT

PHÒNG NUÔI CÂY MÔ

Nuôi cấy mô thực vật là sự kết hợp các kỹ thuật được sử dụng để duy trì và nuôi cấy tế bào, mô hoặc cơ quan thực vật trong điều kiện vô trùng trên môi trường nuôi cấy giàu dinh dưỡng với các thành phần được chọn lọc. nhận dạng.

Các kỹ thuật khác nhau trong nuôi cấy mô thực vật có thể mang lại những lợi thế nhất định so với các phương pháp nhân giống truyền thống, bao gồm:

Việc tạo ra số lượng cây nhân bản chính xác sẽ giúp tạo ra hoa, quả chất lượng cao hoặc các đặc tính mong muốn khác.

Tạo cây trưởng thành nhanh chóng

Sản xuất hàng loạt cây trồng mà không cần hạt giống hoặc thụ phấn để tạo ra hạt giống.

Tái sinh hoàn toàn cây trồng từ tế bào thực vật biến đổi gen.

Tạo ra cây trồng trong điều kiện vô trùng để chúng có thể được vận chuyển với khả năng lây lan bệnh, sâu bệnh hoặc mầm bệnh ở mức tối thiểu.

Có thể tạo ra cây từ hạt mà nếu không nuôi cấy mô thường có tỷ lệ nảy mầm thấp hoặc tăng trưởng kém, ví dụ như hoa lan hoặc cây nắp ấm.

Làm sạch những cây bị nhiễm một số loại virus hoặc các tác nhân lây nhiễm khác và nhanh chóng nhân lên những cây này như một nguồn nguyên liệu sạch cho đồng ruộng và nông nghiệp.

I. PHÒNG GIẶT, SẤY, HẤP VÀ PHÒNG SẢN XUẤT NƯỚC CÂN

Phòng rửa dụng cụ phải có bồn rửa lớn, đường thoát axit riêng, kệ để thiết bị, nguồn cung cấp gas, nước, điện và có thể cả ống khí nén, ống chân không.

Thiết bị và dụng cụ chính:

1. Máy sản xuất nước khử ion

2. Máy chưng cất nước dùng một lần

3. Máy cất nước đôi

4. Nồi hấp khử trùng

5. Lò sấy 300oC (loại công suất lớn)

6. Hẹn giờ

7. Giá kim loại để đựng ống nghiệm khi hấp trong nồi hấp

8. Giấy nhôm hoặc hộp đựng bằng kim loại để tránh tái nhiễm bẩn sau khi khử trùng

9. Xà phòng, HCl hoặc axit sulfuric.

10. Máy rửa pipet, chổi vệ sinh.

11. Bồn rửa đồ dùng

II. PHÒNG CHUẨN BỊ VÀ TRỘN VỪA

Thiết bị và dụng cụ chính:

1. Tủ bảo quản hóa chất

2. Cân phân tích (chính xác đến 0,0001 g)

3. Cân kỹ thuật (chính xác đến 0,01 g)

4. Máy đo pH

5. Máy khuấy từ có gia nhiệt

6. Tủ lạnh 100-200L

7. Tủ lạnh sâu (-20 đến -80oC)

8. Lò vi sóng hoặc bếp đun nóng môi trường khi trộn với agar

9. Kính hiển vi soi nổi

10. Kính hiển vi sinh học

11. Bảng dụng cụ, hóa chất

9. Nếu thực hiện trên quy mô lớn cần có thêm thiết bị: Máy rót media và Máy trộn khi trộn lượng lớn media.

Trong phòng còn có:

- Đồng hồ bấm giờ

- Giá đựng ống nghiệm các loại

- Đồ thủy tinh trong suốt

- Bông không thấm nước

- Dung dịch chuẩn (có sẵn, dung dịch)

- Bộ lọc và giá đỡ chịu nhiệt hoặc phễu lọc bằng thủy tinh.

- Hóa chất kháng khuẩn xử lý mô thực vật: Canxi hypochlorite, Natri hypochlorite, nước brom, H2O2, HgCl2, các loại kháng sinh gồm Rifampicin, polymicins và vancomycin.

Phòng phải có khu vực vô trùng để chứa môi trường dinh dưỡng và nước khử trùng.

III. PHÒNG VĂN HÓA Vô Trùng (Phòng mổ)

Phòng nuôi cấy vô trùng nên là phòng nhỏ có diện tích 10-15m2, có hai lớp cửa để tránh không khí từ bên ngoài di chuyển trực tiếp mang bụi vào, phải bịt kín, sàn và tường nên lát gạch hoặc sơn để vệ sinh và khử trùng thường xuyên. Cửa phòng cấy ghép phải là cửa kính vì trong quá trình cấy ghép rất dễ tiếp xúc với đèn cồn nên cần dễ dàng giao tiếp với bên ngoài những lúc cần thiết.

Đèn UV được gắn trên tường để khử trùng phòng.

Thiết bị và dụng cụ chính:

Tủ nuôi cấy vô trùng (laminar, clean Bench): tủ nuôi cấy tĩnh và tủ dẫn khí vô trùng. Máy ấp phải có đèn trắng để dễ thao tác và có đèn UV để khử trùng trước khi làm việc

Bộ khử trùng (có thể sử dụng bể làm sạch siêu âm)

Máy thở

Đèn cực tím treo tường hoặc gắn trần 1,2m

Thiết bị lọc không khí.

Giá và bảng cho môi trường

Bộ kẹp cấy ghép, dao mổ, vòng cấy, kim nhọn, giấy lọc, chai nước cất, đèn cồn (hoặc đèn gas), cốc cồn 90o

Hóa chất xử lý buồng cấy trước khi cấy: formaldehyde (formalin) 40%, NH3 25%

Áo choàng, mũ, mặt nạ

IV. PHÒNG ĂN

Tất cả các giống được trồng trong điều kiện thích hợp về nhiệt độ ánh sáng, độ ẩm, thời gian chiếu sáng và thông gió. Phòng nuôi cấy có nhiệt độ từ 15 – 30oC tùy theo mẫu nuôi cấy và mục đích thí nghiệm. Nhiệt độ phải được phân bổ đều khắp phòng nuôi, phải có đủ ánh sáng huỳnh quang và có thể kiểm soát được cường độ cũng như thời gian chiếu sáng. Chuồng nuôi phải được thông gió đồng đều và độ ẩm được điều chỉnh từ 20 - 98%.

- Giàn đèn huỳnh quang nhiều ngăn, chiếu sáng nơi nuôi cấy từ 2000-3000 lux.

- Máy điều hòa

- Máy đo ánh sáng

- Nhiệt ẩm kế

- Kệ văn hóa

- Máy lắc ngang 100-200 vòng/phút

- Thiết bị và dụng cụ nuôi cấy tế bào đơn

- Vườn ươm.

Phòng sáng: tường nên sơn màu trắng. Các kệ đèn được lắp thêm đèn ống để chiếu sáng. Trong phòng cần lắp đặt máy móc để kiểm tra nhiệt độ, độ ẩm một cách chính xác.

Phòng nuôi cấy tối: để nuôi cấy mô và điều trị đặc biệt. Căn phòng cần có mọi điều kiện giống như một căn phòng sáng sủa, điểm khác biệt duy nhất là không cần lắp đèn cho cây và các cửa sổ cần được che bằng vải đen.

V. PHÒNG SINH HOÁ

Dùng để tiến hành phân tích chuyên sâu về hóa sinh và sinh học phân tử nhằm thu thập dữ liệu phục vụ nghiên cứu và sản xuất. Tùy theo chi phí đầu tư và mục đích thí nghiệm, có thể trang bị các thiết bị hiện đại như:

Kính hiển vi có kết nối với máy ảnh kỹ thuật số và máy ảnh;
Mũ trùm đầu,
Vườn ươm;
Cân các loại;
Máy cắt mẫu;
Độ pH;
máy ly tâm lạnh;
máy PCR,
Máy PCR thời gian thực;
Máy sắc ký; (HPLC, sắc ký cột, sắc ký lớp mỏng...)
Máy quang phổ có dải đo 190-1100 nm.
Tủ lạnh, tủ đông sâu;
Máy điện di, máy quét DNA
Pipet các loại
Máy quét và chụp ảnh gel
Tủ bảo quản hóa chất, tủ hút khí độc.

BỞI VÌ. HOÁ HỌC

Bên cạnh phòng thí nghiệm cần có hệ thống nhà kính, vườn ươm để trồng cây làm vật liệu nuôi cấy và trồng cây tái sinh trong quá trình chọn lọc invitro.

Hóa chất dùng trong nuôi cấy mô

1. Khăn giấy, nước lau tủ… (Trung Quốc, Việt Nam):

- Fomadehyde (formalin) 40%, lít 10

- NH3 25%, lít 10

- Acolhol (etanol) cồn 90%, VN, lít 50

- NaOCl 1-15%, Trung Quốc, lít 10

- Bột Ca - hypochloride Trung Quốc, kg 10

- Thủy ngân clorua HgCl2, TQ, kg 2

- Tween 20 Trung Quốc, lít 10

- HCl 0,5%, Trung Quốc, 0,5 lít 10

- Xà Bông Việt Nam kg 10

Các dung dịch khử trùng thường dùng trong nuôi cấy mô thực vật:

- Canxi hypocholorite Trung Quốc, kg 5

- Natri hypocholorit Trung Quốc, lít 10

- Hydrogen peroxide Trung Quốc, lít 10

- Nước Brom VN, lít 10

- Cồn Ethyl Trung Quốc, lít 10

- Bạc nitrat Trung Quốc, kg 1

- Clorua Murcuric Trung Quốc, kg 1

- Benzalkonium chloride, lít, Nhật Bản 1

- Than hoạt tính, kg 20

2. Môi trường văn hóa (US/EU):

Chiết xuất men (YE), 500g 2

Casein thủy phân (casein hydrolysate-CH) Ấn Độ, 500g 2

CTAB, 100g 3

Tris-HCl, 100g 3

Tris-base, 100g 3

 2xYT Medium - EZMix™ Bột môi trường phát triển vi sinh vật, 1kg 2

 LB Broth with agar (Lennox) - Môi trường phát triển vi sinh vật dạng bột EZMix™, 6 x 500ml 1

Nguồn carbon và năng lượng

D-(+)-Maltose monohydrat, 500g 2

D-(+)-Glucose, 100g 2

D-(+)-Mannose, 25g 2

D-Mannitol, 500g 2

Sucrose loại I, nuôi cấy tế bào thực vật được thử nghiệm, 1kg 1

Một số hỗn hợp dinh dưỡng: Bột chuối, nước dừa, nước ép cà chua, chiết xuất khoai tây nghiền... 1

Axit amin

 L-Arginine, từ nguồn không phải động vật, thích hợp nuôi cấy tế bào, 98,5-101,0% , 25g 2

 L-Asparagine BioReagent, thích hợp nuôi cấy tế bào, 25g 2

 L-Glutamine, được thử nghiệm nuôi cấy tế bào, 99,0-101,0%, từ nguồn không phải động vật, 25g 2

Các chất dinh dưỡng đa lượng, cấp độ cho cây trồng

NH4NO3, 500g 2

KNO3, 500g 2

CaCl2.2H2O, 500g 2

MgSO4.7H2O, 500g